Priprema uzorka:
Prikupljanje uzorka: sakupljajte uzorke poput krvi, tkiva, sline i urina prema cilju eksperimenta.
Ekstrakcija DNK: Koristite namjenski komplet za ekstrakciju DNK za izdvajanje DNK iz uzorka.
PCR priprema reakcije:
Dizajnerski temeljici: Dizajnirajte određene parove temeljnog temeljnog temeljnog temelja na temelju ciljanog sekvence za pojačavanje predloška DNK.
Pripremite reakcijsku smjesu: uključujući predložak DNK, temeljni premaz, međuspremnik, DNK polimerase, DNTPS (deoksinukleucide Trifosfate), mg 2+ itd.
Postavite PCR program:
Postavke PCR instrumenata: Unesite unaprijed postavljene PCR parametre, poput temperature predgrijavanja od 95 stupnjeva, temperatura denaturacije (poput 95 stepeni), temperatura žarenja (poput 55 stepeni), temperatura proširenja (poput 72 stepena) i broj ciklusa.
PCR reakcija:
Dodajte uzorak: Dodajte reakcijsku smjesu na PCR rezervoar ili čip reakcije, a svaki uzorak obično ima jednu reakciju.
Izvršite PCR: PCR instrument ciklusi prema unaprijed postavljenom programu, uključujući korake grijanja, hlađenja, žarenja i proširenja.
Analiza proizvoda:
Hlađenje nakon pojačanja: Nakon završetka PCR-a, uzorak se nakratko hladi u 4 stepena.
Elektroforetska odvajanje: Koristite gel elektroforezu, poput agarozne gel elektroforeze, za odvajanje PCR proizvoda različitih duljina.
Fluorescentna skeniranje: Fluorescentno označeni temeljni premazi Emitiraju svjetlost specifične talasne dužine u pojačanom proizvodu, a PCR instrument čita ove signale i bilježi ih.
Obrada i tumačenje podataka:
Softver za analizu podataka: Koristite specijalizovani softver za analizu fluorescentnog signala i izračunajte koncentraciju ili relativnu koncentraciju ciljanog fragmenta.
Interpretacija rezultata: Na osnovu PCR krivulje i osnovne linije, utvrdite da li je PCR uspješan, bilo da ciljani fragment postoji i koliko je.
Rezultat za snimanje i očuvanje:
Zabilježite rezultate u eksperimentalnom izvještaju i pravilno sačuvajte izvorne podatke i uzorke.